精子顶体酶活性定量检测试剂盒(改良Kennedy法)说明书精检测

【产品名称】

通用名称:精子顶体酶活性定量检测试剂盒(改良 Kennedy 法)

英文名称:Human Spermatozoa Acrosin Activity Quantitative Assay Kitmodified Kennedy

【包装规格】 20 人份/盒

【预期用途】 用于检测人精液中精子顶体酶活性。

【检验原理】精子顶体内存在精氨酸酰胺酶,其活性可反映顶体酶全部活性。精氨酸酰胺酶以 Nα-苯甲酰-DL精胺酸-ρ-硝酰基苯胺(BAPNA)为底物,分解产生有色产物 —- 硝酰基苯胺,通过测定该产物量可推算出精氨酸酰胺酶的活性。

【主要组成成分】

1.抑制剂 5ml×1 瓶 含 HEPES 0.3g/ml
2.缓冲液 50ml×1 瓶 含氯化钠 0.4g/ml
3.终止液 5ml×1 瓶 含苯甲脒 8.5g/ml
4.底物液 5 ml×2 瓶 含 BAPNA 0.6g/ml
5.棕色空瓶 1 个
6.Eppendorf 1.5ml/个×40 个

( 不同批号试剂盒中各溶液试剂不可以互换)

【储存条件及有效期】 底物液:-20℃及以下保存至少可用 1 年;置 2-8℃保存至少可用 3 个月。其它试剂:2-8℃保存至少可用 1 年。

【适用仪器】 紫外-可见分光光度计(含有 410 nm 滤光片)和 0.5cm 石英比色皿。

【样本要求】以清洁塑料容器盛装精液标本。新鲜标本液化后,室温可放置 3 小时。勿将顶体酶待检标本作冷冻保存。

【检验方法】

  • 试剂准备

临用前配制反应液。方法是:按体积比取底物液 1 份,加缓冲液 4 份(如底物液 1ml,加缓冲液 4ml),充分混匀。

配制反应液注意事项:①配制反应液前,底物液、缓冲液必须置室温平衡,否则新配制的反应液遇冷易形成沉淀;②先加底物液,再缓缓加入缓冲液,且边加边混合溶液,以免局部形成沉淀;③该溶液刚配制完毕,溶液中可能会出现细小颗粒,应待其完全溶解,一旦溶解完全应立即使用,久置会有沉淀析出。

  • 操作方法

1.鲜精液液化后,充分颠倒混匀后计数(M×10^6/ml)

2.每份标本同时设测定管和空白管,每管参加反应的精子数为7.5×10^6个。根据标本精子浓度 (M×106/ml) ,计算每管所需精液量v ml, (计算方法:v=7.5/M)。以容量为1.5ml的Eppendorf管作为测定管和对照管。将精液充分颠倒混匀后,分别于测定管、对照管各加精液 v ml,2000g 离心 20min。

3.倾倒弃去精浆,将 Eppendorf 管倒扣于吸水纸上,吸去流至管口部精浆。

4.测定步骤(见下表):

 三、结果计算

在 24℃,水解 1.0μmol  BAPNA/min 的底物量定义为 1IU 顶体酶活性

顶体酶活性(μIU/106精子)=

(测定OD 值 – 对照OD 值× 2/(495 ×7.5)×106= (测定OD 值 – 对照OD 值/(247.5 ×7.5)×106                   

【阳性判断值或者参考区间】48.2~218.7 μIU/106   精子(WHO)

【检验结果的解释】建议以 0.5cm 厚度比色皿比色。若以 1.0cm 厚度比色皿比色,则操作上需稍作修改,方法是:按照标准操作方法完成检测,比色时每反应管取液体 0.8ml 加于比色皿中,然后再加入等体积(0.8ml)的缓冲液,如此比色皿中有体积为 1.6ml 的液体量,可顺利进行比色。结果仍按上面公式进行计算。

【检验方法的局限性】本试剂盒对温度和精子计数要求高,孵育温度严格控制 24℃。

【产品性能指标】

  1. 试剂盒批内变异系数CV%≤10% 2. 试剂盒批间相对偏差R≤15%
  2. 参考物质测试值相对偏差R不超过±15%

【注意事项】

  1. 以塑料容器保存精液,有利于维持顶体酶的稳定性。
  2. 准确的精子计数至关重要。建议不要以 CASA(计算机辅助精子分析)进行计数,而采取更准确的人工方法。
  3. 标本离心后,应迅速倾弃精浆。不可静置过久,以免精子团微溶,弃精浆时造成精子一并丢失。
  4. 加抑制剂后,将沉淀精子团制成均匀悬浮液时(见“操作方法”),建议采取以手指轻弹管底的方法进行。不可颠倒混匀 Eppendorf 管,也不要用加样枪反复回吸,以免造成精子遗失。
  5. 比色时,需要将反应管内液体转移至比色皿。在吸取反应管内液体时,速度一定要慢,以免将管底沉淀物冲散,致使比色结果有误。
  6. 底物液 4℃保存出现凝固属正常情况。底物液置 2-8℃保存至少可用 3 个月,-20℃及以下保存至少可用 1 年。
  7. 精子顶体酶活性定量检测试剂盒为体外诊断试剂盒,检测结果仅供临床参考,对患者的临床诊断应结合患者病史、体征及其他实验室检查结果等情况综合考虑。

【标识的解释】无

【参考文献】

  1. 熊承良等,主编《人类精子学》,湖北科学技术出版社,2002:427-428
  2. 黄宇锋、许瑞吉,主编《男科学诊断学》,第二军医大学出版社,1999:158-163

【基本信息】

注册人/生产企业名称:深圳华康生物医学工程有限公司

住      所:深圳市大鹏新区葵涌街道银葵路16号君轩科技园D栋

联系方式:电话:0755-89252658 0755-33853878             传真:0755-84208855 0755-33853879

售后服务单位名称:深圳华康生物医学工程有限公司

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生产地址:深圳市大鹏新区葵涌办事处葵新社区银葵路16号君轩公司D栋厂房一层、二层、三层

生产许可证编号:粤食药监械生产许20030802号

【医疗器械注册证书编号/产品技术要求编号】粤械注准 20152400616

【说明书核准日期】2015 年 7 月 6 日

【说明书修改日期】2016 年 6 月 12 日