精浆果糖定量检测试剂盒(吲哚法)说明书

【产品名称】

通用名称:精浆果糖定量检测试剂盒(吲哚法)

英文名称:Seminal Plasma Fructose Quantitative Assay Kit (Indole method)

【包装规格】 20 人份/盒

【预期用途】 用于定量检测人精浆中果糖的含量。

【检验原理】 果糖与吲哚在强酸、加热环境中生成有色复合物,该有色物质在 470nm 波长有最大吸收峰,其吸光度大小与果糖含量成正比。

 
【样本要求】新鲜液化的精液,1000g   离心精液标本10分钟,留取精浆,于-20℃及以下储存

1.去蛋白液 2ml×1 瓶 含 7 水硫酸锌0.0185g/ml
2.碱性溶液 2ml×1 瓶 含氢氧化钠 0.4%
3.稀释液 10ml×1 瓶 蒸馏水
4.果糖校准液 2.5ml×1 瓶 含果糖 2.24mmol/L
5.显色液 2.5ml×1 瓶 含吲哚 0.005g/ml
6.保护剂 3.5ml×1 瓶 含甘油 50%
7.Eppendorf 反应管 1.5ml/个×40 个
8.酶标板架  96 孔/个×1 个
9.酶标微孔板  8 孔/条×12 条
10.浓盐酸 实验室自行配备试剂 含 HCl 浓度大于 32%
(不同批号试剂盒中各溶液试剂不可以互换)

【储存条件及有效期】 2-8℃保存有效期一年

【适用仪器】 酶标仪    配备470nm 或 490nm 或 492nm 滤光片

【检验原理】 果糖与吲哚在强酸、加热环境中生成有色复合物,该有色物质在 470nm 波长有最大吸收峰,其吸光度大小与果糖含量成正比。

【检验方法】

一、 试剂准备

  1. 取精浆 20ul 加稀释液 200ul,混匀。加 50ul 去蛋白液,混合之。
  2. 加 50ul 碱性溶液,混匀。
  3. 室温放置 15 分钟,2000g 离心标本 20 分钟(或 8000g 离心标本 5 分钟)。
  4. 将 24mmol/L 果糖校准液向下稀释为 1.12、0.56、0.28 和 0.14mmol/L 四个浓度。连续稀释方法:取 4 支Eppendorf 管,每管加稀释液200ul,第一管加 2.24mmol/L 的校准液 200ul,充分混匀后从中取 200ul 至第二管,如此类推等倍稀释至第四管,稀释后各管的校准液浓度依次为:1.12、0.56、0.28 和 0.14mmol/L。上酶标仪制备标准曲线。

二、 操作方法

  1. 将上述处理后的标本上清液 50ul 移入试剂盒附带的反应管中。同时设零校准管(50ul 稀释液)和校准管(0.14、0.28、0.56、1.12 和 2.24mmol/L 果糖校准液各 50ul)。
  2. 每管加吲哚试剂 50ul,加浓盐酸(>32%) 500ul;反应管迅速加盖;充分混匀。
  3. 50℃水浴 20 分钟;室温条件以冰水冷却 15 分钟或放-20℃ 准确冷却 5 分钟。
  4. 以加样器分别将反应管内液体 250ul 小心移人酶标微孔板中,每管分装 2 孔。
  5. 每微孔内加保护剂 50ul,振荡混匀;酶标仪 470nm 波长比色读取结果。

操作简表如下:

测定管 零校准管 校准(5 管)
去蛋白标本(ul) 50
校准(ul) 50
稀释液(ul) 50
显色液(ul) 50 50 50
浓盐酸(ul) 500 500 500
迅速加盖,充分混匀。50℃水浴 20 分钟。

室温以冰水混合液冷却 15 分钟或放-20℃准确冰却 5 分钟。

将离心管内液体移至酶标微孔,每管分装 2 孔,每孔 250ul。

每微孔加保护液 50ul,充分振荡后酶标仪 470nm 或 490nm 或 492nm 比色(空气作空白)。

三、 结果计算

1、为简化操作,校准液浓度乘以标本稀释系数(16)后,将所得参数输入酶标仪建立标准曲线,标准曲线以平滑曲线方式拟合。仪器所判读结果即为已计算标本稀释系数的精浆实际果糖浓度(mmol/L)。

 

校准实际浓度 (mmol/L) 输入酶标仪的应用浓度(mmol/L)
0 0
0.14 2.24
0.28 4.48
0.56 8.96
1.12 17.92
2.24 35.84

2、果糖最终检测结果以“μmol/一次射精”方式报告,因此需要在酶标仪检测结果基础上,再分别乘以受试者此次的排精总量(ml),即:一次射精果糖量(μmol)=精浆果糖浓度(mmol/L)×一次射精的精液总体积(ml)

3、所测得标本的值若高于标准曲线上限,则将标本进一步稀释后重新测定。

【阳性判断值或者参考区间】 一次射精≥13μmol(WHO)

【检验结果的解释】当标本检测结果出现极低值(接近零值或出现负值)时,注意观察标本 A 值是否小于零校准的 A

值。若标本 A 值小于零校准的 A 值,则标本测定值极有可能为 0(由于实验操作误差导致标准曲线拟合出现偏差),应 r2         0.95 重新测定(设复孔)或谨慎处理(视标准曲线拟合相关系数而定,如 ≥ ,且标本复孔检测显示操作误差很小,则

可考虑报告 0 值。若标准曲线不理想,则必须重新检测。

【检验方法的局限性】采用本试剂盒方法需要浓盐酸参入反应。

【产品性能指标】

  1. 试剂盒批内变异系数CV%≤10%
  2. 试剂盒批间相对偏差R%≤15%
  3. 参考物质测试值相对偏差R不超过±15%
  4. 干扰试验干扰率不超过±10%

【注意事项】

  1. 受试者精液标本采集前应禁欲 3-7 天,标本采集过程中,射精应彻底,标本收集应完整,不得遗漏。实验室须准确记录一次排精总量(ml)。
  2. 精液液化后,应迅速分离精浆并冷冻保存,否则果糖继续消耗致使检测结果偏低。
  3. 标本制备过程中,要严格执行规定程序。即加去蛋白液后务必充分混匀试管,然后再加碱性溶液。不可加完去蛋白液后紧接着加碱性溶液而后一起混合(去蛋白效果有差别)。
  4. 加完浓盐酸后应快速给反应管加盖。否则因浓盐酸挥发过快,不能保证强酸环境致使反应不完全,显色过淡。
  5. 水浴过程中,反应管必须加盖,以免盐酸挥发使反应强度减弱;若反应结束却发现阳性检测管不显色或显色较正常显色浅,应首先检查:①浓盐酸试剂是否已过量挥发;②加完显色剂和浓盐酸后反应管空气暴露时间稍长;③加塞是否紧密。
  1. 加浓盐酸时务必加强安全防护措施。加样最好在通风橱中进行,戴防护手套、穿隔离衣、戴防护口罩。操作中注意切勿使浓盐酸与皮肤、眼睛等部位接触,一旦接触,立即以大量清水冲洗,并即时就医。
  2. 反应完毕将液体从反应管移入微孔板比色时,建议每管均设双孔比色,以减少板孔间变异和操作误差。
  3. 比色前微孔板应进行充分振荡(非常重要)。孔内应避免气泡产生。微孔板要平放于板架,并使板架与比色光路垂直。微孔底部必须干燥清洁,以保证其良好的透光性。比色之前以不易脱屑之吸水性材料轻拭微孔板底部水份,以保证比色结果的准确性。
  1. 酶标仪若无 470nm 波长滤光片,可暂以 490nm 或 492nm 波长进行比色。
  2. 本试剂盒提供的反应管经过特殊处理,勿轻易以其它离心管代替。本试剂盒提供的反应管作为 50℃孵育反应管用,精浆去蛋白及校准液稀释请在普通试管进行。如试剂盒提供的反应管不够用,可用洁净玻璃试管代替,反应过程中也必须加塞。
  1. 精浆果糖定量检测试剂盒为体外诊断试剂盒,检测结果仅供临床参考,对患者的临床诊断应结合患者病史、体征及其他实验室检查结果等情况综合考虑。

【标识的解释】无

【参考文献】

  1. 丛玉隆,《当代体液分析技术与临床》,中国科学技术出版社,1999,136-137。
  2. Karvonen,M,J.&Malm,M.(1955) Colorimetric determination of fructose with indol.Scandinavian Journal of Clinical

Laboratory Investigation,7:305-7.

【基本信息】

注册人/生产企业名称:深圳华康生物医学工程有限公司

住   所:深圳市大鹏新区葵涌街道银葵路16号君轩科技园D栋

联系方式:电话:0755-89252658 0755-33853878        传真:0755-84208855 0755-33853879

售后服务单位名称:深圳华康生物医学工程有限公司

联系方式:电话:0755-89252658 0755-33853878        传真:0755-84208855 0755-33853879

生产地址:深圳市大鹏新区葵涌办事处葵新社区银葵路16号君轩公司D栋厂房一层、二层、三层

生产许可证编号:粤食药监械生产许20030802号

【医疗器械注册证书编号/产品技术要求编号】粤械注准 20152400617

【说明书核准日期】2015 年 7 月 6 日

【说明书修改日期】2016 年 6 月 12 日